Bestandteile des Kits

 

·   Versuchsanleitung

 

·   E. coli Stamm DH5a auf LB (Amp l00 mg/ml) -Agarplatte

 

·   E. coli Stamm DH5apRM auf LB (Amp l00 mg/ml) -Agarplatte

 

·   500 ml Lysat von l.a(ca. 3x10⁷ pfu/ml) in SM Puffer + Chloroform

 

·  500  ml Lysat von l.apRM (ca. 5x10⁴ pfu/ml) in SM Puffer + Chloroform

 

Hinweise zur Lagerung der Bakterien und Phagen: Die LB-Agarplatten können im Kühlschrank für ca. 10 Wochen gelagert werden. Bei Bedarf kann ein Abstrich mit einer Impföse entnommen und auf einer LB-Agarplatte weiterkultiviert werden. Für die permanente Konservierung der Stämme ist es ratsam, Glycerinkulturen anzulegen und diese bei -20⁰C (***Kühlfach) zu lagern. Die Lambda-Lysate sind bei 4⁰C praktisch unbegrenzt haltbar. Allerdings sollte der Phagen-Titer 1-2 mal pro Jahr überprüft werden.

 

·   LB-Agar-Pulver (ausreichend für 21 LB-Agar) 

·   LB-Medium-Pulver (ausreichend für 600 ml LB-Medium)

 

Hinweise zur Behandlung der Nährmedien: Beide Nährmedien müssen vor Gebrauch autoklaviert werden. Sollten die Medien nicht bei einem Versuch aufgebraucht werden, können diese in kleineren Portionen auf mehrere Gefäße verteilt und so dauerhaft bei Raumtemperatur gelagert werden.

 

Herstellung von Top-Agar: Mischen Sie LB-Medium und LB-Agar nach dem Autoklavieren im Volumenverhältnis 1:1 in einem sterilen Gefäß. Die mitgelieferte Menge an Pulver ist gedacht zur Herstellung von 500 ml Top-Agar.

 

• 2 ml Ampicillin-Lösung (100 mg/ml); l000 x konzentriert 
  Hinweis: Die Stammlösung ist bei -20o C im Dunkeln unbegrenzt haltbar.

• 1 ml Maltose-Monohydrat (20%); 100x konzentriert.  
  Hinweis: Die Lagerung erfolgt am besten bei -200C.

• 1 ml MgSO4-Lösung(lM); 100 x konzentriert 
  Hinweis: Die Lagerung erfolgt am besten bei -200C.

• 1,4 g SM-Puffer-Pulver (ausreichend für 100 ml SM-Puffer)
  (Zusammensetzung: 0,12 g NaCl, 0,04 g MgSO4 1,22g Tris, 0,02 g Gelatinepulver)
  Hinweis: Das Pulver wird wegen der Gelatine unter Erwärmen gelöst. Der pH -Wert  des SM-Puffers muß auf 7,5 mit HCI eingestellt werden! Der SM-Puffer sollte autoklaviert werden. Die Lagerung erfolgt bei Raumtemperatur.

• 10 Petrischalen, steril 
  Hinweis:    Die Petrischalen können nach Entfernen des Agars wiederverwendet werden.

• 8 Glasröhrchen (l0ml), unsteril

• 80 Eppendorfgeräße, unsteril

• Pipettenspitzen gelb und blau, unsteril

 

 

Zusätzlich benötigte Materialien:

 

• Inkubator

• Schüttler

• Wasserbad

• Tischzentrifuge

• Mikroliterpipetten

• Impföse

• sterile Reagenzgläser

• demineralisiertes Wasser

• Chloroform